Perbezaan Antara Ligation dan Sticky End Ligation | Blunt vs Ligation End Sticky
Perbezaan Utama - Blunt vs Ligation End Sticky
Endonucleases sekatan adalah enzim spesifik yang memotong DNA double-stranded (dsDNA). Mereka juga dikenali sebagai gunting molekul dalam biologi Molekul. Enzim sekatan dapat mengenal pasti urutan pendek spesifik dsDNA yang dikenali sebagai tapak pengiktirafan dan mengikat ikatan fosfodiester dan hidrogen untuk membuka helaian berganda. Hasil daripada belahan oleh enzim ini, serpihan DNA dihasilkan dengan pelbagai jenis hujung seperti hujung melekit dan hujung tumpul. Ligase DNA adalah enzim yang digunakan dalam biologi molekular untuk bergabung dengan dua helai DNA yang berdekatan dengan membentuk ikatan baru. Langkah ini dikenali sebagai ligation dan mengikut jenis hujung DNA ligitan, mereka boleh dirujuk sebagai ligation akhir tumpul dan ligation akhir lengket. Perbezaan utama antara ligation tumpul dan lutut akhir ialah ligation akhir yang tumpul berlaku di antara serpihan DNA yang mengandungi dua hujung tumpul manakala ligation akhir melekat berlaku di antara 5 'dan 3' overhangs. Dibandingkan dengan ligation akhir tumpul, ligation akhir yang melekit lebih cekap dan stabil.
KANDUNGAN
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah Ligation End Blunt
3. Apakah Ligation End Sticky
4. Perbandingan Side by Side - Blunt vs Ligation End Sticky
5. Ringkasan
Apakah Ligation End Blunt?
Sesetengah endonucleases sekatan boleh memotong DNA di dasar yang bertentangan dan menghasilkan serpihan DNA akhir yang tumpul. Enzim-enzim ini dikenali sebagai pemotong akhir yang tumpul; mereka berpecah terus ke tengah-tengah kawasan sekatan tanpa meninggalkan pangkalan penyejukan terkandas. Tamat blunt juga dikenali sebagai tak berkesudahan kerana mereka tidak mempunyai 3 'dan 5' pangkalan yang menggantung di hujungnya. Kedua-dua helai ditamatkan dari pasangan asas pada hujung tumpul. Enzim pemotongan tumpul biasa adalah EcoRV HaeIII, AluI dan SmaI.
Ligation akhir yang tumpul terlibat di antara dua hujung tumpul. Ia bukan ligation yang menonjolkan asas. Ligation ini kurang cekap daripada ligation akhir yang melekit. Walau bagaimanapun, dalam beberapa keadaan, ligation akhir tumpul menjadi lebih berfaedah daripada ligation akhir yang melekit, terutamanya ketika melegakan produk PCR. Produk PCR sentiasa dihasilkan dengan hujung tumpul. Ligation end blunt tidak memerlukan hujung pelengkap dalam DNA untuk ligation.
Rajah 01: Penghasilan akhir tumpul oleh enzim Eco RV
Apakah Ligation End Sticky?
Sesetengah endonucleases sekatan boleh memotong dsDNA, meninggalkan sekeping DNA terkandas tunggal pada akhir. Hujung ini dikenali sebagai akhir yang melekat atau melekat. Ligation akhir yang melekit berlaku di antara dua serpihan DNA yang mengandungi susunan padanan kerana ujung melekit dipunyai dengan asas yang tidak berpasangan dan memerlukan asas pelengkap untuk membentuk bon. Oleh itu, perlu menggunakan enzim sekatan yang sama untuk kedua-dua sumber DNA untuk menghasilkan serpihan ligating yang sepadan.
Ligation akhir lekit lebih berkesan dan sering dikehendaki dalam proses pengklonan. Terdapat beberapa enzim sekatan yang menghasilkan hujung melekat. Mereka adalah EcoRI, BamHI, HindIII dan lain-lain.
Rajah 02: Penghasilan sticky end oleh enzim Eco RI
Apakah perbezaan di antara Ligation End Blunt dan Sticky End?
- Diff Artikel Tengah sebelum Jadual ->
Blunt vs Ligation End Sticky |
|
| Ligation end blunt berlaku di antara dua serpihan DNA akhir yang tumpul. | Ligation akhir yang melekit berlaku di antara dua serpihan DNA serasi dengan hujung melekit. |
| Enzim | |
| Pemotong akhir yang tumpul menghasilkan hujung tumpul. | Pemotong akhir melekit menghasilkan hujung melekit atau padat. |
| Keperluan Pencocokan Berakhir | |
| Ia tidak memerlukan serpihan padanan atau asas pelengkap. | Ia memerlukan asas pelengkap di hujung untuk membentuk pasangan asas. |
| Kecekapan | |
| Ia kurang cekap daripada ligation akhir lengket | Ia lebih cekap daripada ligation akhir tumpul. |
Ringkasan - Blunt vs Ligation End Sticky
Endonucleases sekatan dapat mengekang dsDNA dan menghasilkan serpihan DNA dengan hujung yang berbeza. Mereka mengiktiraf urutan tertentu dan menyekat DNA yang menghasilkan tompok-tompok melekit dan tumpul. Hujung melekat mempunyai pangkalan yang tidak berpasangan pada akhir serpihan. Hujung Blunt dicipta kerana belahan lurus dan mereka mempunyai pasangan asas pada hujungnya. Ligation akhir yang melekit memerlukan dua kepingan DNA pelengkap tunggal. Ligation end blunt berlaku antara mana-mana dua serpihan akhir tumpul. Ini adalah perbezaan antara ligation yang tumpul dan lekat.
Rujukan:
1. Roberts, Richard J. "Bagaimana enzim sekatan menjadi kerja biologi molekul. "Prosiding Akademi Sains Kebangsaan. National Acad Sciences, n. d. Web. 12 Apr. 2017
2. Adnan, Amna. Penggunaan Enzim Sekatan dalam Bioteknologi. N. p., n. d. Web. 12 Apr. 2017
Image Courtesy:
1. "Tapak Sekatan EcoRV. rsh "Oleh Ramin Herati - Dibuat dengan Inkscape (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons
2. "Restriction enzyme Eco RI" Oleh Tinastella - Kerja sendiri (Domain Umum) melalui Wikimedia Commons
