Perbezaan Antara Halaman SDS dan Blot Barat | SDS Page vs Western Blot

Perbezaan Utama - SDS Page vs Western Blot

Blotting Barat adalah teknik yang mengesan protein tertentu dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah utama: electrohoresis gel, pembungkus, dan hibridisasi. Elektroforesis gel polyacrylamide natrium dodecyl sulfate (SDS Page) adalah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein mengikut saiznya (berat molekul). Blot Barat adalah helaian membran khas yang digunakan untuk memindahkan corak protein yang sama di SDS Page. Perbezaan utama antara SDS Page dan blot barat adalah bahawa SDS Page membenarkan pemisahan protein dalam campuran manakala blot barat membolehkan pengesanan dan kuantifikasi protein tertentu dari campuran. Kedua-duanya berguna dalam kajian analisis protein.

KANDUNGAN

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama

2. Apakah halaman SDS

3. Apakah Blot Barat

4. Perbandingan Side by Side - SDS Page vs Western Blot

5. Ringkasan

Apakah halaman SDS?

SDS Page adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Ia biasanya digunakan dalam biokimia, genetik, forensik dan biologi molekul. Setelah protein diekstrak dari sampel, mereka dijalankan pada gel yang terdiri daripada SDS dan polyacrylamide. SDS adalah detergen anionik yang digunakan untuk menyelaraskan protein (denatur protein) dan memberikan caj negatif kepada protein linearized berkadar dengan jisim molekul mereka. Polyacrylamide menjadi sokongan padu untuk gel. Protein yang diturunkan yang bermuatan negatif berpindah ke arah akhir positif radas melalui gel. Mengikut saiz protein, kelajuan migrasi berbeza di antara protein dan pemisahan berlaku. Oleh itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan saiznya.

Penyediaan gel polyacrylamide untuk fraksinasi protein adalah langkah penting dalam SDS Page. Kepekatan polyacrylamide yang betul dan jenis ejen cross-linking yang digunakan sangat mempengaruhi sifat-sifat fizikal gel, yang menjadikan pemisahan sebenar protein yang berlainan. Saiz liang gel perlu diuruskan dengan betul untuk pemisahan yang berkesan. Walau bagaimanapun, SDS Page dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.

Teknik SDS Page mempunyai batasan utama dalam analisis protein. Oleh kerana SDS denatur protein sebelum pemisahan, ia tidak membenarkan pengesanan aktiviti enzimatik, interaksi mengikat protein, cofactor protein, dan sebagainya.

Rajah 01: SDS Page

Apakah Blot Barat?

Teknik blotting Barat membolehkan pengesanan protein tertentu dari campuran protein dan pengukuran kuantiti dan berat molekul protein. Blot Barat adalah membran yang digunakan semasa prosedur membungkus untuk mendapatkan imej cermin pola protein dalam gel SDS-polyacrylamide. Membran yang digunakan untuk pembengkakan barat kebanyakannya terdiri daripada nitrocellulose atau polyvinylidene difluoride (PVDF). Membran dengan protein yang dipindahkan boleh digunakan untuk mengenal pasti protein yang dikehendaki. Ia memerlukan antibodi berkualiti tinggi untuk mengesan protein yang dikehendaki oleh hibridisasi. Antibodi mengikat antigen spesifiknya dan mendedahkan kehadiran antigen yang diinginkan yang merupakan protein.

Memindahkan protein dari gel polyacrylamide SDS ke blot barat dilakukan oleh electroblotting. Ini adalah kaedah yang berkesan dan cepat yang menyebabkan protein menjadi elektroforesis dari gel dan melepasi membran nitrocellulose (blot barat).

Gambar 02: Blot Barat

Apakah perbezaan antara Halaman SDS dan Blot Barat?

- Diff Artikel Tengah sebelum Jadual ->

SDS Page vs Western Blot
SDS Page adalah teknik elektroforesis gel.	Blot Barat adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mengesan protein tertentu dari campuran.
Gunakan
halaman SDS membolehkan pemisahan protein mengikut saiznya.	Blot Barat membenarkan pemindahan protein pada gel gel SDS tanpa mengubah coraknya & membolehkan hibridisasi dengan antibodi spesifik.
Kekurangan
Denaturasi protein, kos tinggi, dan kehadiran bahan kimia neurotoksin adalah keburukan teknik ini.	Teknik ini memakan masa dan memerlukan keadaan terkawal peribadi dan khusus yang berpengalaman.

Ringkasan - Halaman SDS vs Western Blot

SDS dan blot barat adalah dua kaedah yang terlibat dalam analisis protein. SDS Page membolehkan pemisahan mudah protein pada gel mengikut berat molekul mereka. Blot Barat membantu mengesahkan kehadiran dan kuantiti protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi spesifik. Ini adalah perbezaan antara SDS Page dan blot barat.

Rujukan:

1. Blancher, C., dan A. Jones. "SDS -PAGE dan Teknik Blotting Barat. "Kaedah dalam perubatan molekul. U. S. Perpustakaan Perubatan Negara, n. d. Web. 27 Mac 2017

2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, dan David H. Petering. "SDS-PAGE asli: Resolusi Tinggi Elektroforetik Pemisahan Protein Dengan Pengekalan Hartanah Asli Termasuk Ion Logam Berikat. "Metallomics: sains biometal bersepadu. U. S. Perpustakaan Perubatan Negara, Mei 2014. Web. 27 Mac 2017.

Image Courtesy:

1. "SDS-PAGE Electrophoresis" Oleh Bensaccount di Wikipedia Bahasa Inggeris (CC BY 3. 0) melalui Wikimedia Commons

2. "Western blot 114A" Oleh Amanthabagdon - Kerja sendiri (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons