Perbezaan Antara Kloning dan Subcloning | Cloning vs Subcloning

Pengklonan dan Subcloning adalah prosedur biologi molekul yang mencipta sel atau genetik identik genetik yang mengandungi DNA atau gen yang menarik. Pengklonan adalah teknik yang melibatkan kemasukan gen yang berminat atau DNA ke dalam vektor, replikasi dalam bakteria host, dan pengeluaran sel atau organisma yang tepat salinan solek genetik. Subcloning adalah teknik yang melibatkan pemasukan gen yang menarik, yang telah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasinya di dalam bakteria host, dan pengeluaran salinan gen yang sama secara genetik atau organisma. Perbezaan utama antara kloning dan subcloning adalah,

dalam pengklonan, gen yang menarik, sekali dilubangi ke dalam vektor, meneruskan proses pengklonan sementara, dalam subcloning, gen yang dikongkongkan kepentingan dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan kembali ke vektor penerima dan meneruskan proses .

KANDUNGAN

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama

2. Apakah Cloning

3. Apakah Subcloning

4. Perbandingan Side by Side - Cloning vs Subcloning

5. Ringkasan

Apakah Cloning?

Cloning adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang sama secara genetik. Secara semulajadi, pengklonan berlaku dalam cara pembiakan aseksual. Apabila tidak ada pengambilan semula genetik atau perubahan, sel-sel anak perempuan menerima solek genetik yang sama dari ibu bapa. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon oleh pembelahan binary, budding, mitosis, dan lain-lain. Dalam biologi molekular, gen pengklonan atau serpihan tertentu DNA adalah kaedah popular untuk mengkaji struktur dan fungsi seksyen DNA tertentu itu.

Objektif utama pengklonan molekul adalah membuat berjuta-juta salinan sel atau organisma yang serupa dengan genetik yang mempunyai fragmen DNA yang menarik (terutamanya gen). Ia mewujudkan organisma dengan salinan genetik yang tepat dari yang lain. Terutamanya, gen tertentu diklonkan dalam kajian molekular untuk mendapatkan maklumat struktur dan fungsi dan untuk penjujukan DNA. Juga, untuk pengeluaran protein tertentu atau produk dalam skala besar, kloning digunakan secara meluas.

Prosedur Pengklonan

Langkah-langkah asas prosedur kloning adalah seperti berikut.

Pengenalpastian dan pengasingan gen yang menarik. (Memperluas gen faedah oleh PCR).

1. Penghadaman sekatan gen yang menarik (Sekatan endonuclease memotong gen).
2. Penghadaman sekatan DNA vektor.(DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuclease sekatan yang sama).
3. Memasukkan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
4. Transformasi vektor rekombinan ke dalam bakteria tuan rumah.
5. Pengasingan dan pengenalpastian bakteria yang berubah (vektor plasmid harus mengandungi gen yang boleh dipilih, yang paling biasa adalah gen rintangan antibiotik untuk menyaring bakteria berubah).
6. Ekspresi gen rekombinan dalam tuan rumah.
7. Rajah_01: Prosedur Pengklonan

Apakah Subcloning?

Subcloning adalah prosedur untuk menggerakkan gen yang menarik dari satu vektor ke vektor yang lain untuk melihat ungkapan gen untuk mendapatkan kefungsian gen yang dikehendaki. Dalam kaedah ini, dua vektor terlibat; iaitu vektor induk dan vektor destinasi. Kemasukan klon dipindahkan semula ke dalam vektor kedua dalam subcloning. Objektif pemindahan gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen lagi dalam fragmen DNA yang diklonkan dan menyatakannya sendiri. Enzim sekatan digunakan dalam prosedur ini pada mulanya.

Subcloning Procedure

Langkah asas subcloning adalah seperti berikut.

Dengan bantuan endonucleases sekatan, pemisahan DNA kepentingan dalam plasmid penderma (vektor induk).

1. Pengukuhan DNA minat menggunakan PCR.
2. Pembersihan produk PCR (DNA faedah) oleh elektroforesis gel.
3. Pembukaan plasmid penerima oleh endonucleases sekatan yang sama digunakan untuk memisahkan DNA kepentingan dalam plasmid induk.
4. Ligation dari DNA faedah (gen) ke plasmid penerima untuk membuat plasmid subcloned.
5. Transformasi vektor subcloned ke dalam bakteria hos yang berwibawa.
6. Pemeriksaan sel berubah.
7. Pembersihan DNA plasmid dan penggunaan untuk penjujukan DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.
8. Subcloning dijalankan pada masa-masa mengasingkan satu gen dari kumpulan klon gen atau apabila gen minat diperlukan untuk memindahkan ke plasmid berguna untuk melihat fungsi gen yang menarik.

Rajah_02: Prosedur Subcloning

Apakah perbezaan antara Cloning dan Subcloning?

- Diff Perkara Tengah sebelum Jadual ->

Cloning vs Subcloning

Cloning adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang sama secara genetik.
Subcloning adalah prosedur untuk menggerakkan gen yang menarik dari satu vektor ke vektor yang lain untuk melihat ungkapan gen untuk mendapatkan kefungsian gen yang dikehendaki.	Proses
Pisahkan DNA kepentingan dari organisma dan dimasukkan ke vektor sekali dan kloning
Sudah kloning DNA dipisahkan dari vektor pertama dan dimasukkan ke dalam vektor kedua dan diklon.	Masukkan Pergerakan melalui Vektor
Tidak bergerak masuk (DNA faedah) dari satu vektor ke vektor yang lain.
Pindahkan sisipan dari vektor induk ke vektor destinasi.	Ringkasan - Cloning vs Subcloning

Cloning mencipta sel atau genetik yang sama dengan gen yang dimasukkan atau DNA yang menarik.Ia meneruskan pemisahan dan penyisipan DNA kepentingan ke dalam vektor dan ungkapan dalam bakteria host. Subcloning berkongsi langkah yang sama dengan pengklonan. Walau bagaimanapun, dalam subcloning, sudah mengkloning serpihan DNA (gen minat) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteria host. Itulah perbezaan utama antara kloning dan subcloning.

Rujukan

Lodish, Harvey. "DNA Cloning dengan Vectors Plasmid. "Biologi Sel Molekul. Edisi ke-4. U. S. Perpustakaan Perubatan Negara, 01 Jan 1970. Web. 05 Mac 2017

1. "Subcloning. "Wikipedia. Yayasan Wikimedia, 14 Feb. 2017. Web. 06 Mac 2017
2. "Subcloning. "Subcloning | Buka artikel Akses | Jurnal Akses Terbuka | Prosiding Persidangan | Penyunting | Pengarang | Pengulas | peristiwa saintifik. N. p., n. d. Web. 06 Mac 2017
3. Wackerhage, Henning. "Bagaimana subclone. "Bagaimana subclone. N. p., 01 Jan 1970. Web. 06 Mar. 2017
4. Image Courtesy

Molecular Cloning Procedure - Oleh CNX OpenStax [CC BY 4. 0], melalui Wikimedia Commons

1. Subcloning Procedure - By Uploader asal Takometer di Wikipedia bahasa Inggeris (Dipindah dari en. wikipedia ke Commons.) [CC BY 2. 5], melalui Wikimedia Commons