Perbezaan Antara SYBR Green dan Taqman | SYBR Green vs Taqman

Perbezaan Utama - SYBR Green vs Taqman

SYBR Hijau dan Taqman adalah dua kaedah yang digunakan untuk mengesan atau menonton proses penguatan PCR masa nyata. SYBR Green adalah kaedah yang berasaskan pewarna asid nukleik yang menyamai manakala Taqman adalah kaedah yang berasaskan penyelidikan hidrolisis. Kedua-dua teknologi ini direka untuk menghasilkan pendarfluor semasa PCR, yang membolehkan mesin PCR masa nyata memantau tindak balas dalam "masa nyata". SYBR Kaedah hijau dilakukan menggunakan pewarna neon yang dipanggil hijau SYBR dan mengesan amplifikasi dengan mengikat pewarna untuk menghasilkan DNA terkandas ganda. Taqman dijalankan menggunakan probe berlabel dua dan mengesan amplifikasi dengan penurunan probe oleh Taq polimerase dan melepaskan fluorophore. Ini adalah perbezaan utama antara SYBR Green dan Taqman.

KANDUNGAN

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama

2. Apakah SYBR Hijau

3. Apakah Taqman

4. Perbandingan Side by Side - SYBR Green vs Taqman

5. Ringkasan

Apakah SYBR Green?

SYBR Green adalah pewarna fluoresen yang digunakan untuk mencemarkan asid nukleat, terutamanya DNA terkandas dalam Biologi Molekul. Kaedah Green SYBR digunakan untuk mengukur produk PCR semasa PCR masa nyata. Apabila ia mengikat dengan DNA, kompleks DNA-dye yang dihasilkan menyerap cahaya biru dan memancarkan cahaya hijau yang sengit. Ia berlaku kerana perubahan struktur yang berlaku dalam molekul pewarna apabila mengikat dengan DNA double-stranded. Apabila PCR mencipta lebih banyak DNA, lebih banyak molekul pewarna mengikat dengan DNA, menghasilkan lebih banyak pendarfluor. Oleh itu, pendarfluor meningkat dengan pengumpulan produk PCR. Oleh itu, jumlah produk PCR boleh diukur secara kuantitinya oleh pengesanan pendarfluor SYBR Green.

Pewarna hijau SYBR juga boleh digunakan untuk pelabelan DNA dalam cytometry dan mikroskopi pendarfluor. Ethidium bromide telah berjaya digantikan oleh SYBR Green sejak Ethidium bromide adalah pewarna karsinogenik dengan masalah pelupusan semasa visualisasi DNA dalam elektroforesis gel.

Terdapat kelebihan dan kekurangan kaedah hijau SYBR. Kaedah ini sangat sensitif, murah dan mudah digunakan. Walau bagaimanapun, disebabkan keupayaannya untuk mengikat sebarang DNA terkandas dua, pengikatan tidak spesifik boleh membawa kepada kuantifikasi produk PCR.

Rajah 01: Teknik Hijau SYBR

Apakah Taqman?

Taqman adalah kaedah alternatif untuk SYBR Green untuk memantau proses PCR masa nyata. Kaedah ini bergantung kepada enzim taq polimerase 5 '- 3' exonuclease untuk menurunkan kuar semasa pelanjutan helai baru dan pelepasan fluorofore.Probe dua berlabel digunakan dalam kaedah ini dan berdasarkan kepada hidrolisis probe. Probe adalah fluorescently labeled oligonucleotides DNA yang mempunyai molekul reporter fluorescent (fluorophore) pada akhir 5 'dan molekul quencher pada akhir 3'. Mereka direka bentuk untuk mengikat templat terkandas di seberang anneal primer. Taq polimerase menambah nukleotida ke primer dan memanjangkan untai baru ke atas probe dwi-berlabel. Setelah polimerase Taq memenuhi probe, tindakan exonuclease polimerase Taq mengaktifkan dan merendahkan siasatan. Apabila ia melengkapkan sintesis sehelai tali baru, siasatannya akan mengalami kemerosotan dan melepaskan fluorophore. Pembebasan fluorofore menghasilkan pendarfluor. Molekul Fluorescent Quencher dengan cekap menghilangkan cahaya yang dipancarkan dan menghasilkan output untuk kuantifikasi produk PCR. Pelepasan fluorofores dan kuantiti produk PCR adalah berkadar. Oleh itu, kuantifikasi boleh dilakukan dengan mudah oleh kaedah Taqman.

Rajah 02: Kaedah Taqman

Kaedah Taqman digunakan dalam masa nyata PCR, kuantifikasi ekspresi gen, pengesanan polimorfisme genetik, kuantifikasi penghapusan DNA kromosom, pengenalan bakteria, pengesahan analisis microarray, genotip SNP dll Apakah perbezaan antara hijau SYBR dan Taqman?

- Diff bahagian Tengah sebelum Jadual ->

SYBR Hijau vs Taqman

SYBR Hijau adalah berdasarkan pewarna DNA yang mengikat.
Taqman bergantung kepada probe hibridisasi dan aktiviti eksonuclease 5 'hingga 3' Taq polimerase.	Percetakan Berurat Fluorescently
Tiada probe dilabel fluorescently tidak diperlukan.
Dwi-berlabel pemeriksaan diperlukan.	Analisis Gen Multiplex
Ia tidak boleh digunakan untuk sasaran gen multipleks.
Ia boleh digunakan untuk sasaran gen multipleks.	Kos
Ini lebih murah.
Ini lebih mahal.	Specificity
Ini kurang spesifik dan mengikat dengan mana-mana DNA dua helai
Ini sangat spesifik kerana probe mengesan produk penguatan tertentu.	Keberkesanan
Ini kurang berkesan.
Ini sangat berkesan.	Aplikasi
Ini digunakan dalam PCR masa nyata, visualisasi agarose gel, label DNA dll.
Ini digunakan dalam PCR masa nyata, kuantifikasi ekspresi gen, pengesanan polimorfisme genetik, dan sebagainya.	Ringkasan - SYBR Green dan Taqman

Taqman dan hijau SYBR adalah dua kaedah yang digunakan dalam PCR masa nyata (PCR kuantitatif). Kedua-dua kaedah ini membolehkan pengalkalian produk PCR dengan cekap dan bergantung kepada pelepasan pendarfluor. Kaedah Taqman menggunakan kuar dwi-berlabel untuk mengesan DNA terkumpul sementara kaedah SYBR Green menggunakan pewarna neon. Kedua-dua kaedah ini juga mempunyai aplikasi yang berlainan dalam biologi molekul.

Rujukan:

1. Tajadini, Mohamad Hasan, Mojtaba Panjehpour, dan Shaghayegh Haghjooy Javanmard. "Perbandingan kaedah SYBR Hijau dan TaqMan dalam analisis tindak balas rantaian polimerase masa sebenar kuantitatif empat subtipe reseptor adenosin."Advanced Biomedical Research. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, 2014. Web. 13 Mac 2017.

2. "Prinsip dasar PCR masa nyata. "Real Time PCR, Kuantitatif (qPCR), Primer & Mastermix: Primerdesign Ltd. N. p., n. d. Web. 13 Mac 2017.

3. "SYBR Hijau dan Pewarna PCR Masa Nyata Yang Lain. "Biocompare. N. p., 05 Apr 2010. Web. 14 Mac 2017

Image Courtesy:

1. "PCR dengan SYBR hijau" Oleh -Ngonaar 23: 09, 7 Mac 2006 (UTC) - Graf ini dicipta oleh Ygonaar dengan titik Kuasa, CC BY-SA 3. 0, // commons. wikimedia. org / w / indeks. php? curid = 619528

2. "Taqman" Pengguna: Braindamaged - Kerja sendiri (Domain Awam) melalui Wikimedia Commons